ઉત્પાદનો
2019-nCoV માટે લાઇફકોસ્મ SARS-Cov-2-RT-PCR શોધ કીટ
અપેક્ષિત ઉપયોગ
આ કીટનો ઉપયોગ ગળાના સ્વેબ, નાસોફેરિંજલ સ્વેબ, બ્રોન્કોઆલ્વીઓલર લેવેજ પ્રવાહી, ગળફાનો ઉપયોગ કરીને નવા કોરોનાવાયરસ (2019-nCoV) ની ગુણાત્મક તપાસ માટે થાય છે. આ ઉત્પાદનનું શોધ પરિણામ ફક્ત ક્લિનિકલ સંદર્ભ માટે છે, અને તેનો ઉપયોગ ક્લિનિકલ નિદાન અને સારવાર માટે એકમાત્ર પુરાવા તરીકે થવો જોઈએ નહીં. દર્દીના ક્લિનિકલ અભિવ્યક્તિઓ અને અન્ય પ્રયોગશાળા પરીક્ષણો સાથે સંયોજનમાં સ્થિતિનું વ્યાપક વિશ્લેષણ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
નિરીક્ષણ સિદ્ધાંત
આ કીટ એક-પગલાની RT- PCR ટેકનોલોજી પર આધારિત છે. હકીકતમાં, 2019 ના નવા કોરોનાવાયરસ (2019-nCoV) ORF1ab અને N જનીનોને એમ્પ્લીફિકેશન લક્ષ્ય ક્ષેત્રો તરીકે પસંદ કરવામાં આવ્યા હતા. ચોક્કસ પ્રાઇમર્સ અને ફ્લોરોસન્ટ પ્રોબ્સ (N જનીન પ્રોબ્સને FAM સાથે લેબલ કરવામાં આવે છે અને ORF1ab પ્રોબ્સને HEX સાથે લેબલ કરવામાં આવે છે) નમૂનાઓમાં 2019 નવા પ્રકારના કોરોનાવાયરસ RNA શોધવા માટે ડિઝાઇન કરવામાં આવ્યા છે. કીટમાં નમૂના સંગ્રહ, RNA અને PCR એમ્પ્લીફિકેશનની પ્રક્રિયાનું નિરીક્ષણ કરવા માટે એન્ડોજેનસ ઇન્ટરનલ કંટ્રોલ ડિટેક્શન સિસ્ટમ (CY5 સાથે લેબલ થયેલ આંતરિક નિયંત્રણ જનીન પ્રોબ) પણ શામેલ છે, જેનાથી ખોટા નકારાત્મક પરિણામો ઓછા થાય છે.
મુખ્ય ઘટકો
| ઘટકો | વોલ્યુમ(૪૮ટન/કિટ) |
| RT-PCR પ્રતિક્રિયા ઉકેલ | ૯૬µલિ |
| nCOV પ્રાઈમર TaqMan પ્રોબેમિક્સચર (ORF1ab, N જીન, RnaseP જીન) | ૮૬૪µલિ |
| નકારાત્મક નિયંત્રણ | ૧૫૦૦µલિ |
| nCOV હકારાત્મક નિયંત્રણ (l ORF1ab N Gene) | ૧૫૦૦µલિ |
પોતાના રીએજન્ટ્સ: આરએનએ નિષ્કર્ષણ અથવા શુદ્ધિકરણ રીએજન્ટ્સ. નકારાત્મક/સકારાત્મક નિયંત્રણ: સકારાત્મક નિયંત્રણ એ લક્ષ્ય ટુકડો ધરાવતું આરએનએ છે, જ્યારે નકારાત્મક નિયંત્રણ ન્યુક્લિક એસિડ-મુક્ત પાણી છે. ઉપયોગ દરમિયાન, તેઓએ નિષ્કર્ષણમાં ભાગ લેવો જોઈએ અને તેમને ચેપી ગણવા જોઈએ. તેમને સંબંધિત નિયમો અનુસાર નિયંત્રિત અને નિકાલ કરવા જોઈએ.
આંતરિક સંદર્ભ જનીન માનવ RnaseP જનીન છે.
સંગ્રહ શરતો અને સમાપ્તિ તારીખ
-20±5℃, 5 થી વધુ વખત વારંવાર ઠંડું અને પીગળવાનું ટાળો, 6 મહિના માટે માન્ય.
લાગુ પડતું સાધન
FAM / HEX / CY5 અને અન્ય મલ્ટી-ચેનલ ફ્લોરોસન્ટ PCR સાધન સાથે.
નમૂનાની આવશ્યકતાઓ
1. લાગુ પડતા નમૂનાના પ્રકારો: ગળાના સ્વેબ, નાસોફેરિંજલ સ્વેબ, બ્રોન્કોઆલ્વીઓલર લેવેજ પ્રવાહી, ગળફા.
2. નમૂના સંગ્રહ (એસેપ્ટિક તકનીક)
ફેરીન્જિયલ સ્વેબ: કાકડા અને પાછળના ફેરીન્જિયલ દિવાલને એક જ સમયે બે સ્વેબથી સાફ કરો, પછી સ્વેબ હેડને સેમ્પલિંગ સોલ્યુશન ધરાવતી ટેસ્ટ ટ્યુબમાં બોળી દો.
ગળફા: દર્દીને ઊંડી ઉધરસ આવે પછી, ઉધરસમાંથી નીકળેલા ગળફાને સ્ક્રુ કેપ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં એકત્રિત કરો જેમાં સેમ્પલિંગ સોલ્યુશન હોય; બ્રોન્કોઆલ્વીઓલર લેવેજ પ્રવાહી: તબીબી વ્યાવસાયિકો દ્વારા નમૂના લેવા. 3. નમૂનાઓનો સંગ્રહ અને પરિવહન.
વાયરસ આઇસોલેશન અને આરએનએ પરીક્ષણ માટેના નમૂનાઓનું શક્ય તેટલી વહેલી તકે પરીક્ષણ કરવું જોઈએ. જે નમૂનાઓ 24 કલાકની અંદર શોધી શકાય છે તેને 4℃ પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે; જે નમૂનાઓ 24 કલાકની અંદર શોધી શકાતા નથી
કલાકો -70℃ અથવા તેનાથી ઓછા તાપમાને સંગ્રહિત કરવા જોઈએ (જો -70℃ ની કોઈ સંગ્રહ સ્થિતિ ન હોય, તો તે હોવા જોઈએ
(અસ્થાયી રૂપે -20℃ રેફ્રિજરેટરમાં સંગ્રહિત). પરિવહન દરમિયાન નમૂનાઓએ વારંવાર થીજી જવાનું અને પીગળવાનું ટાળવું જોઈએ. સંગ્રહ પછી શક્ય તેટલી વહેલી તકે પ્રયોગશાળામાં મોકલવા જોઈએ. જો નમૂનાઓને લાંબા અંતર સુધી પરિવહન કરવાની જરૂર હોય, તો સૂકા બરફના સંગ્રહની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
પરીક્ષણ પદ્ધતિઓ
૧ નમૂના પ્રક્રિયા અને આરએનએ નિષ્કર્ષણ (નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષેત્ર)
RNA નિષ્કર્ષણ માટે 200μl પ્રવાહી નમૂના લેવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે. સંબંધિત નિષ્કર્ષણ પગલાં માટે, વાણિજ્યિક RNA નિષ્કર્ષણ કીટની સૂચનાઓનો સંદર્ભ લો. નકારાત્મક અને નકારાત્મક બંને
આ કીટમાં રહેલા નિયંત્રણો નિષ્કર્ષણમાં સામેલ હતા.
2 પીસીઆર રીએજન્ટ તૈયારી (રીએજન્ટ તૈયારી ક્ષેત્ર)
2.1 કીટમાંથી બધા ઘટકો દૂર કરો અને ઓગાળીને ઓરડાના તાપમાને મિક્સ કરો. ઉપયોગ કરતા પહેલા થોડી સેકન્ડ માટે 8,000 rpm પર સેન્ટ્રીફ્યુજ; રીએજન્ટ્સની જરૂરી માત્રાની ગણતરી કરો, અને નીચેના કોષ્ટકમાં બતાવ્યા પ્રમાણે પ્રતિક્રિયા પ્રણાલી તૈયાર થાય છે:
| ઘટકો | નાઈટ્રોજન સર્વિંગ (25µl સિસ્ટમ) |
| nCOV પ્રાઈમર TaqMan પ્રોબેમિક્સચર | ૧૮ μl × નાઇટ્રોજન |
| RT-PCR પ્રતિક્રિયા ઉકેલ | 2 μl × N |
| *N = પરીક્ષણ કરાયેલા નમૂનાઓની સંખ્યા + 1 (નકારાત્મક નિયંત્રણ) + 1 (nCOV)હકારાત્મક નિયંત્રણ) | |
૨.૨ ઘટકોને સારી રીતે મિશ્રિત કર્યા પછી, ટ્યુબની દિવાલ પરના બધા પ્રવાહીને ટ્યુબના તળિયે પડવા દેવા માટે થોડા સમય માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો, અને પછી 20 µl એમ્પ્લીફિકેશન સિસ્ટમને PCR ટ્યુબમાં ઉમેરો.
૩ નમૂના લેવા (નમૂના તૈયાર કરવાનો વિસ્તાર)
નિષ્કર્ષણ પછી 5μl નકારાત્મક અને હકારાત્મક નિયંત્રણો ઉમેરો. પરીક્ષણ કરવાના નમૂનાના RNA ને PCR પ્રતિક્રિયા ટ્યુબમાં ઉમેરવામાં આવે છે.
ટ્યુબને ચુસ્તપણે બંધ કરો અને તેને એમ્પ્લીફિકેશન ડિટેક્શન એરિયામાં સ્થાનાંતરિત કરતા પહેલા થોડી સેકન્ડ માટે 8,000 rpm પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો.
૪ પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન (એમ્પ્લીફાઇડ ડિટેક્શન એરિયા)
૪.૧ સાધનના નમૂના કોષમાં પ્રતિક્રિયા નળી મૂકો, અને નીચે મુજબ પરિમાણો સેટ કરો:
| સ્ટેજ | ચક્ર નંબર | તાપમાન(°C) | સમય | સંગ્રહસાઇટ |
| ઉલટાવોટ્રાન્સક્રિપ્શન | 1 | 42 | ૧૦ મિનિટ | - |
| પૂર્વ-વિકૃતીકરણn | 1 | 95 | ૧ મિનિટ | - |
| ચક્ર | 45 | 95 | ૧૫ સેકંડ | - |
| 60 | 30નો દાયકા | માહિતી સંગ્રહ |
ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટ ડિટેક્શન ચેનલ પસંદગી: ફ્લોરોસેન્સ સિગ્નલ માટે FAM、HEX、CY5 ચેનલ પસંદ કરો. સંદર્ભ માટે ફ્લોરોસેન્ટ NONE, કૃપા કરીને ROX પસંદ કરશો નહીં.
૫ પરિણામ વિશ્લેષણ (સેટિંગ માટે કૃપા કરીને દરેક સાધનની પ્રાયોગિક સૂચનાઓનો સંદર્ભ લો)
પ્રતિક્રિયા પછી, પરિણામો સાચવો. વિશ્લેષણ પછી, છબી અનુસાર બેઝલાઇનનું પ્રારંભિક મૂલ્ય, અંતિમ મૂલ્ય અને થ્રેશોલ્ડ મૂલ્ય ગોઠવો (વપરાશકર્તા વાસ્તવિક પરિસ્થિતિ અનુસાર ગોઠવી શકે છે, પ્રારંભિક મૂલ્ય 3~15 પર સેટ કરી શકાય છે, અંતિમ મૂલ્ય 5~20 પર સેટ કરી શકાય છે, ગોઠવણ) વિન્ડોના થ્રેશોલ્ડ પર, થ્રેશોલ્ડ રેખા લોગરીધમિક તબક્કામાં છે, અને નકારાત્મક નિયંત્રણનો એમ્પ્લીફિકેશન વળાંક સીધી રેખા અથવા થ્રેશોલ્ડ રેખાની નીચે છે).
૬ ક્વોટી કંટ્રોલ (પરીક્ષણમાં પ્રક્રિયાગત નિયંત્રણનો સમાવેશ થાય છે) નકારાત્મક કંટ્રોલ: FAM, HEX, CY5 ડિટેક્શન ચેનલો માટે કોઈ સ્પષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ નથી.
COV પોઝિટિવ કંટ્રોલ: FAM અને HEX ડિટેક્શન ચેનલોનો સ્પષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ, Ct મૂલ્ય≤32, પરંતુ CY5 ચેનલનો કોઈ એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ નથી;
ઉપરોક્ત આવશ્યકતાઓ એક જ પ્રયોગમાં એકસાથે પૂર્ણ થવી જોઈએ; અન્યથા, પ્રયોગ અમાન્ય રહેશે અને તેને પુનરાવર્તિત કરવાની જરૂર પડશે.
7 પરિણામોનું નિર્ધારણ.
૭.૧ જો પરીક્ષણ નમૂનાના FAM અને HEX ચેનલોમાં કોઈ એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ અથવા Ct મૂલ્ય> 40 ન હોય, અને CY5 ચેનલમાં એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ હોય, તો એવું નક્કી કરી શકાય છે કે નમૂનામાં કોઈ 2019 નવો કોરોનાવાયરસ (2019-nCoV) RNA નથી;
.2 જો પરીક્ષણ નમૂનામાં FAM અને HEX ચેનલોમાં સ્પષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન વણાંકો હોય, અને Ct મૂલ્ય ≤40 હોય, તો તે નક્કી કરી શકાય છે કે નમૂના 2019 ના નવા કોરોનાવાયરસ (2019-nCoV) માટે સકારાત્મક છે.
૭.૩ જો પરીક્ષણ નમૂનામાં ફક્ત FAM અથવા HEX ની એક ચેનલમાં સ્પષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ હોય, અને Ct મૂલ્ય ≤40 હોય, અને બીજી ચેનલમાં કોઈ એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ ન હોય, તો પરિણામોનું ફરીથી પરીક્ષણ કરવાની જરૂર છે. જો ફરીથી પરીક્ષણ પરિણામો સુસંગત હોય, તો નમૂનાને નવા માટે હકારાત્મક ગણી શકાય.
કોરોનાવાયરસ 2019 (2019-nCoV). જો ફરીથી પરીક્ષણનું પરિણામ નકારાત્મક આવે, તો તે નક્કી કરી શકાય છે કે નમૂના 2019 ના નવા કોરોનાવાયરસ (2019-nCoV) માટે નકારાત્મક છે.
હકારાત્મક નિર્ણય મૂલ્ય
કીટના સંદર્ભ CT મૂલ્ય અને આંતરિક નિયંત્રણ સંદર્ભ મૂલ્ય 40 નક્કી કરવા માટે ROC કર્વ પદ્ધતિનો ઉપયોગ થાય છે.
પરીક્ષણ પરિણામોનું અર્થઘટન
૧. દરેક પ્રયોગનું નકારાત્મક અને હકારાત્મક નિયંત્રણો માટે પરીક્ષણ કરવું જોઈએ. પરીક્ષણ પરિણામો ફક્ત ત્યારે જ નક્કી કરી શકાય છે જ્યારે નિયંત્રણો ગુણવત્તા નિયંત્રણ આવશ્યકતાઓને પૂર્ણ કરે.
2. જ્યારે FAM અને HEX શોધ ચેનલો પોઝિટિવ હોય છે, ત્યારે સિસ્ટમ સ્પર્ધાને કારણે CY5 ચેનલ (આંતરિક નિયંત્રણ ચેનલ) નું પરિણામ નકારાત્મક હોઈ શકે છે.
૩. જ્યારે આંતરિક નિયંત્રણ પરિણામ નકારાત્મક હોય, જો ટેસ્ટ ટ્યુબના FAM અને HEX શોધ ચેનલો પણ નકારાત્મક હોય, તો તેનો અર્થ એ છે કે સિસ્ટમ અક્ષમ છે અથવા કામગીરી ખોટી છે, તો પરીક્ષણ અમાન્ય છે. તેથી, નમૂનાઓનું ફરીથી પરીક્ષણ કરવાની જરૂર છે.
