ઉત્પાદનો
2019-nCoV માટે Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR ડિટેક્શન કીટ
અપેક્ષિત ઉપયોગ
આ કીટનો ઉપયોગ નવા કોરોનાવાયરસ (2019-nCoV) ની ગુણાત્મક તપાસ માટે થ્રોટ સ્વેબ્સ, નેસોફેરિન્જિયલ સ્વેબ્સ, બ્રોન્કોઆલ્વીઓલર લેવેજ ફ્લુઇડ, સ્પુટમનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવે છે. આ પ્રોડક્ટનું ડિટેક્શન પરિણામ માત્ર ક્લિનિકલ સંદર્ભ માટે છે, અને તેનો ઉપયોગ થવો જોઈએ નહીં. ક્લિનિકલ નિદાન અને સારવાર માટેના પુરાવા. દર્દીના ક્લિનિકલ અભિવ્યક્તિઓ અને અન્ય પ્રયોગશાળા પરીક્ષણો સાથે સંયોજનમાં સ્થિતિના વ્યાપક વિશ્લેષણની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
નિરીક્ષણ સિદ્ધાંત
આ કિટ વન-સ્ટેપ RT- PCR ટેકનોલોજી પર આધારિત છે.હકીકતમાં, 2019 નવા કોરોનાવાયરસ (2019-nCoV) ORF1ab અને N જનીનોને એમ્પ્લીફિકેશન લક્ષ્ય ક્ષેત્રો તરીકે પસંદ કરવામાં આવ્યા હતા.વિશિષ્ટ પ્રાઇમર્સ અને ફ્લોરોસન્ટ પ્રોબ્સ (N જીન પ્રોબ્સને FAM સાથે લેબલ કરવામાં આવે છે અને ORF1ab પ્રોબ્સને HEX સાથે લેબલ કરવામાં આવે છે) નમૂનાઓમાં 2019 નવા-પ્રકારના કોરોનાવાયરસ આરએનએને શોધવા માટે રચાયેલ છે.નમૂનાના સંગ્રહ, આરએનએ અને પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશનની પ્રક્રિયા પર દેખરેખ રાખવા માટે કીટમાં અંતર્જાત આંતરિક નિયંત્રણ શોધ પ્રણાલી (CY5 સાથે લેબલ થયેલ આંતરિક નિયંત્રણ જનીન ચકાસણી)નો પણ સમાવેશ થાય છે, જેનાથી ખોટા નકારાત્મક પરિણામો ઘટે છે.
મુખ્ય ઘટકો
| ઘટકો | વોલ્યુમ(48T/કીટ) |
| RT-PCR પ્રતિક્રિયા ઉકેલ | 96µl |
| nCOV પ્રાઈમર TaqMan પ્રોબેમિક્સચર (ORF1ab, N જીન, RnaseP જીન) | 864µl |
| નકારાત્મક નિયંત્રણ | 1500µl |
| nCOV હકારાત્મક નિયંત્રણ (l ORF1ab N Gene) | 1500µl |
પોતાના રીએજન્ટ્સ: RNA નિષ્કર્ષણ અથવા શુદ્ધિકરણ રીએજન્ટ્સ.નેગેટિવ/પોઝિટિવ કંટ્રોલ: સકારાત્મક કંટ્રોલ એ આરએનએ છે જેમાં લક્ષ્ય ટુકડો હોય છે, જ્યારે નેગેટિવ કંટ્રોલ ન્યુક્લિક એસિડ-મુક્ત પાણી છે.ઉપયોગ દરમિયાન, તેઓ નિષ્કર્ષણમાં ભાગ લેવો જોઈએ અને ચેપી ગણવો જોઈએ.તેમને સંબંધિત નિયમો અનુસાર હેન્ડલ અને નિકાલ થવો જોઈએ.
આંતરિક સંદર્ભ જનીન માનવ RnaseP જનીન છે.
સંગ્રહ શરતો અને સમાપ્તિ તારીખ
-20±5℃, પુનરાવર્તિત ઠંડું અને 5 કરતાં વધુ વખત પીગળવાનું ટાળો, 6 મહિના માટે માન્ય.
લાગુ સાધન
FAM/HEX/CY5 અને અન્ય મલ્ટી-ચેનલ ફ્લોરોસન્ટ પીસીઆર સાધન સાથે.
નમૂના જરૂરિયાતો
1.લાગુ નમુનાના પ્રકારો: ગળાના સ્વેબ્સ, નેસોફેરિન્જિયલ સ્વેબ્સ, બ્રોન્કોઆલ્વીઓલર લેવેજ ફ્લુઇડ, સ્પુટમ.
2.નમૂનો સંગ્રહ (એસેપ્ટિક તકનીક)
ફેરીન્જિયલ સ્વેબ: કાકડા અને પશ્ચાદવર્તી ફેરીન્જિયલ દિવાલને એક જ સમયે બે સ્વેબ વડે સાફ કરો, પછી સ્વેબ હેડને સેમ્પલિંગ સોલ્યુશન ધરાવતી ટેસ્ટ ટ્યુબમાં બોળી દો.
સ્પુટમ: દર્દીને ઊંડી ઉધરસ આવે તે પછી, કફવાળા ગળફાને સ્ક્રુ કેપ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં એકત્રિત કરો જેમાં સેમ્પલિંગ સોલ્યુશન હોય;બ્રોન્કોઆલ્વિઓલર લેવેજ પ્રવાહી: તબીબી વ્યાવસાયિકો દ્વારા નમૂના લેવા.3. નમૂનાનું સંગ્રહ અને પરિવહન
વાયરસના અલગતા અને આરએનએ પરીક્ષણ માટેના નમૂનાઓનું શક્ય તેટલું જલદી પરીક્ષણ કરવું જોઈએ.24 કલાકની અંદર શોધી શકાય તેવા નમુનાઓને 4℃ પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે;જેઓ 24 ની અંદર શોધી શકાતા નથી
કલાકો -70℃ અથવા નીચે સંગ્રહિત હોવા જોઈએ (જો -70℃ ની કોઈ સ્ટોરેજ સ્થિતિ નથી, તો તે હોવી જોઈએ
અસ્થાયી રૂપે -20℃ રેફ્રિજરેટરમાં સંગ્રહિત).નમુનાઓને પરિવહન દરમિયાન વારંવાર ઠંડું અને પીગળવાનું ટાળવું જોઈએ.નમૂના એકત્રિત કર્યા પછી શક્ય તેટલી વહેલી તકે પ્રયોગશાળામાં મોકલવા જોઈએ.જો નમૂનાઓ લાંબા અંતર પર પરિવહન કરવાની જરૂર હોય, તો સૂકા બરફના સંગ્રહની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
પરીક્ષણ પદ્ધતિઓ
1 સેમ્પલ પ્રોસેસિંગ અને આરએનએ એક્સટ્રક્શન (સેમ્પલ પ્રોસેસિંગ એરિયા)
RNA નિષ્કર્ષણ માટે 200μl પ્રવાહી નમૂના લેવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.સંબંધિત નિષ્કર્ષણ પગલાં માટે, વ્યાવસાયિક RNA નિષ્કર્ષણ કિટ્સની સૂચનાઓનો સંદર્ભ લો.નકારાત્મક અને નકારાત્મક બંને
આ કીટમાંના નિયંત્રણો નિષ્કર્ષણમાં સામેલ હતા.
2 પીસીઆર રીએજન્ટ તૈયારી (રીએજન્ટ તૈયારી વિસ્તાર)
2.1 કિટમાંથી તમામ ઘટકોને દૂર કરો અને ઓરડાના તાપમાને પીગળીને મિક્સ કરો.ઉપયોગ કરતા પહેલા થોડી સેકંડ માટે 8,000 rpm પર સેન્ટ્રીફ્યુજ;રીએજન્ટની આવશ્યક માત્રાની ગણતરી કરો અને નીચેના કોષ્ટકમાં બતાવ્યા પ્રમાણે પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ તૈયાર કરવામાં આવી છે:
| ઘટકો | N સર્વિંગ (25µl સિસ્ટમ) |
| nCOV પ્રાઈમર TaqMan પ્રોબેમિક્સચર | 18 µl × N |
| RT-PCR પ્રતિક્રિયા ઉકેલ | 2 µl × N |
| *N = પરીક્ષણ કરાયેલા નમૂનાઓની સંખ્યા + 1 (નકારાત્મક નિયંત્રણ) + 1 (nCOVહકારાત્મક નિયંત્રણ) | |
2.2 ઘટકોને સંપૂર્ણ રીતે મિશ્રિત કર્યા પછી, ટ્યુબની દિવાલ પરના તમામ પ્રવાહીને ટ્યુબના તળિયે આવવા દેવા માટે થોડા સમય માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો અને પછી 20 μl એમ્પ્લીફિકેશન સિસ્ટમને પીસીઆર ટ્યુબમાં અલિક્વોટ કરો.
3 સેમ્પલિંગ (નમૂનો તૈયાર કરવાનો વિસ્તાર)
નિષ્કર્ષણ પછી નકારાત્મક અને હકારાત્મક નિયંત્રણોના 5μl ઉમેરો.પરીક્ષણ કરવાના નમૂનાના આરએનએને પીસીઆર પ્રતિક્રિયા ટ્યુબમાં ઉમેરવામાં આવે છે.
ટ્યુબને ચુસ્તપણે કેપ કરો અને તેને એમ્પ્લીફિકેશન ડિટેક્શન એરિયામાં સ્થાનાંતરિત કરતા પહેલા થોડી સેકંડ માટે 8,000 rpm પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો.
4 પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન (એમ્પ્લીફાઈડ ડિટેક્શન એરિયા)
4.1 ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટના સેમ્પલ સેલમાં રિએક્શન ટ્યુબ મૂકો અને નીચે પ્રમાણે પરિમાણો સેટ કરો:
| સ્ટેજ | સાયકલ સંખ્યા | તાપમાન(°C) | સમય | સંગ્રહસાઇટ |
| રિવર્સટ્રાન્સક્રિપ્શન | 1 | 42 | 10 મિનિટ | - |
| પ્રિ-ડિનેચ્યુરેટિયોn | 1 | 95 | 1 મિનિટ | - |
| સાયકલ | 45 | 95 | 15 સે | - |
| 60 | 30 | માહિતી સંગ્રહ |
ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટ ડિટેક્શન ચેનલ પસંદગી: ફ્લોરોસેન્સ સિગ્નલ માટે FAM、HEX、CY5 ચેનલ પસંદ કરો.સંદર્ભ ફ્લોરોસન્ટ NONE માટે, કૃપા કરીને ROX પસંદ કરશો નહીં.
5 પરિણામ વિશ્લેષણ (સેટિંગ માટે કૃપા કરીને દરેક સાધનની પ્રાયોગિક સૂચનાઓનો સંદર્ભ લો)
પ્રતિક્રિયા પછી, પરિણામો સાચવો.વિશ્લેષણ પછી, છબી અનુસાર પ્રારંભિક મૂલ્ય, અંતિમ મૂલ્ય અને બેઝલાઇનની થ્રેશોલ્ડ મૂલ્યને સમાયોજિત કરો (વપરાશકર્તા વાસ્તવિક પરિસ્થિતિ અનુસાર સમાયોજિત કરી શકે છે, પ્રારંભિક મૂલ્ય 3 ~ 15 પર સેટ કરી શકાય છે, અંતિમ મૂલ્ય આના પર સેટ કરી શકાય છે. 5~20, ગોઠવણ) લઘુગણક ગ્રાફમાં વિન્ડોની થ્રેશોલ્ડ પર, થ્રેશોલ્ડ રેખા લઘુગણક તબક્કામાં છે, અને નકારાત્મક નિયંત્રણની એમ્પ્લીફિકેશન વળાંક સીધી રેખા છે અથવા થ્રેશોલ્ડ રેખાની નીચે છે).
6 ક્વોટી કંટ્રોલ (પરીક્ષણમાં એક પ્રક્રિયાગત નિયંત્રણ શામેલ છે) નકારાત્મક નિયંત્રણ: FAM, HEX, CY5 શોધ ચેનલો માટે કોઈ સ્પષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન વળાંક નથી
COV પોઝિટિવ નિયંત્રણ: FAM અને HEX ડિટેક્શન ચેનલોના સ્પષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ, Ct value≤32, પરંતુ CY5 ચેનલનું કોઈ એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ નથી;
ઉપરોક્ત આવશ્યકતાઓ એક જ પ્રયોગમાં એક સાથે મળવી આવશ્યક છે;અન્યથા, પ્રયોગ અમાન્ય છે અને તેને પુનરાવર્તિત કરવાની જરૂર છે.
7 પરિણામોનું નિર્ધારણ.
7.1 જો ટેસ્ટ સેમ્પલની FAM અને HEX ચેનલોમાં કોઈ એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ અથવા Ct વેલ્યુ> 40 ન હોય અને CY5 ચેનલમાં એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ હોય, તો તે નક્કી કરી શકાય છે કે ત્યાં કોઈ 2019 નવો કોરોનાવાયરસ નથી (2019-nCoV) નમૂનામાં આરએનએ;
.2 જો પરીક્ષણ નમૂનામાં FAM અને HEX ચેનલોમાં સ્પષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન વણાંકો હોય અને Ct મૂલ્ય ≤40 હોય, તો તે નક્કી કરી શકાય છે કે નમૂના 2019ના નવા કોરોનાવાયરસ (2019-nCoV) માટે સકારાત્મક છે.
7.3 જો પરીક્ષણ નમૂનામાં FAM અથવા HEX ની માત્ર એક ચેનલમાં સ્પષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ હોય, અને Ct મૂલ્ય ≤40 હોય, અને બીજી ચેનલમાં કોઈ એમ્પ્લીફિકેશન કર્વ ન હોય, તો પરિણામોનું ફરીથી પરીક્ષણ કરવાની જરૂર છે.જો પુનઃપરીક્ષણના પરિણામો સુસંગત હોય, તો નમૂના નવા માટે હકારાત્મક હોવાનું નક્કી કરી શકાય છે
કોરોનાવાયરસ 2019 (2019-nCoV).જો પુનઃપરીક્ષણનું પરિણામ નકારાત્મક છે, તો તે નક્કી કરી શકાય છે કે નમૂના 2019 નવા કોરોનાવાયરસ (2019-nCoV) માટે નકારાત્મક છે.
સકારાત્મક નિર્ણય મૂલ્ય
ROC કર્વ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કિટના સંદર્ભ CT મૂલ્યને નક્કી કરવા માટે થાય છે અને આંતરિક નિયંત્રણ સંદર્ભ મૂલ્ય 40 છે.
પરીક્ષણ પરિણામોનું અર્થઘટન
1.દરેક પ્રયોગ નકારાત્મક અને હકારાત્મક નિયંત્રણો માટે પરીક્ષણ થવો જોઈએ.જ્યારે નિયંત્રણો ગુણવત્તા નિયંત્રણ આવશ્યકતાઓને પૂર્ણ કરે છે ત્યારે જ પરીક્ષણ પરિણામો નક્કી કરી શકાય છે
2.જ્યારે FAM અને HEX ડિટેક્શન ચેનલો સકારાત્મક હોય છે, ત્યારે સિસ્ટમ સ્પર્ધાને કારણે CY5 ચેનલ (આંતરિક નિયંત્રણ ચેનલ)નું પરિણામ નકારાત્મક હોઈ શકે છે.
3.જ્યારે આંતરિક નિયંત્રણ પરિણામ નકારાત્મક હોય, જો ટેસ્ટ ટ્યુબની FAM અને HEX ડિટેક્શન ચેનલો પણ નકારાત્મક હોય, તો તેનો અર્થ એ થાય કે સિસ્ટમ અક્ષમ છે અથવા ઓપરેશન ખોટું છે, ટી ટેસ્ટ અમાન્ય છે.તેથી, નમૂનાઓનું ફરીથી પરીક્ષણ કરવું જરૂરી છે.
